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人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的培養(yǎng)步驟及凍存方式

更新時間:2023-02-12 點擊量:1173
  人乳腺癌細(xì)胞MCF-7保留了分化乳腺上皮的許多特性。包括:能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成圓形復(fù)合物(domes)。該細(xì)胞含有WNT7B癌基因。腫瘤壞死因子α(TNFalpha)可以抑制MCF-7細(xì)胞生長。細(xì)胞經(jīng)抗雌激素處理后能調(diào)節(jié)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白IGFBPS分泌。
  
  人乳腺癌細(xì)胞MCF-7培養(yǎng)步驟:
  
  1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
  
  2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
  
  對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
  
  1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
  
  2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
  
  3.輕輕吹打細(xì)胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
  
  4.按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
  
  人乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞凍存:(注:非無血清凍存液方法,無血清凍存液方法請參考我司貨號:C7001)
  
  1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
  
  2、添加0.25%YDBM消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
  
  3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
  
  4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃1.5h,然后將其移入-80℃。