可以這樣說(shuō)，對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞，每一次的消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否，狀態(tài)好與不好至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過(guò)這個(gè)問(wèn)題，自己養(yǎng)的細(xì)胞開(kāi)始的幾代長(zhǎng)的還挺好的，可是穿過(guò)幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞不行了，狀態(tài)越來(lái)越差勁了。對(duì)于這個(gè)問(wèn)題，可以非?？隙ǖ卣f(shuō)，你的消化環(huán)節(jié)出問(wèn)題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以，越長(zhǎng)越差。在消化的過(guò)程中，你加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個(gè)問(wèn)題就是，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)是不一樣的，每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒(méi)有那么牢固的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣的，大家爭(zhēng)取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。
1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類(lèi)盡量洗掉）。
2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來(lái)。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過(guò)的細(xì)胞對(duì)比觀察看誰(shuí)長(zhǎng)的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感度了）
3)吸干凈瓶?jī)?nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤(rùn)洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察，待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開(kāi)始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對(duì)比)4)然后把前面剛吸出來(lái)的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細(xì)胞間隙明顯，細(xì)胞獨(dú)立開(kāi)來(lái)的時(shí)候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實(shí)際情況把握）。
溫馨提醒：
1、可將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管中，備用；細(xì)胞傳代時(shí)，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
2、確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時(shí)將部分細(xì)胞凍存，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，避免后期實(shí)驗(yàn)失誤可能發(fā)生細(xì)胞污染或死亡而導(dǎo)致的細(xì)胞丟失，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
