簡要描述：NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞種屬：人；貼壁生長；生長周期：3~4天超微結(jié)構(gòu)研究表明細(xì)胞質(zhì)中有Clara細(xì)胞的特征結(jié)構(gòu)細(xì)胞表達(dá)主要的肺表面結(jié)合蛋白SP-A的蛋白和RNA。不表達(dá)SP-B和SP-C。他們在軟瓊脂中的形成效率為0.83%。培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。傳代情況: P(121+5)
產(chǎn)品型號： YKLNCI-H358
所屬分類：細(xì)胞庫
更新時間：2024-04-29
NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
傳代方法:
產(chǎn)品僅用于科研收到細(xì)胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。
(一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。
(二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。
注意:傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。
操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
